相关系数均大于 0.99

摘 要：目的高效：建立高效液相色谱法同时快速测定四川豆瓣中5种食品添加剂安赛蜜、苯甲酸、液相乙酸山梨酸、色谱时测赛蜜酸山糖精钠及脱氢乙酸的法同检测方法。方法：样品提取液使用 C18 色谱（250mm×4.6mm5μm）采用二极管阵列检测器进行检测；考察了检测波长、定川豆瓣不同流动相体系，中安不同流动相比例、苯甲梯度洗脱及流动相流速对实验结果的梨酸影响。结果：安赛蜜、糖精脱氢苯甲酸、钠及山梨酸、高效糖精钠及脱氢乙酸在 5.0 ～100.0µg/mL 范围内，液相乙酸浓度与峰面积有良好的色谱时测赛蜜酸山线性关系，相关系数均大于 0.99，法同样品的定川豆瓣加标回收率分别为 81.2% ～ 92.2%、84.1%～ 96.8%、91.1% ～ 99.0%、85.1% ～ 92.3%、89.9% ～ 101.2%，相对标准偏差均小于 3.00%。结论：本方法操作简单、快速、准确，可适用于四川豆瓣中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸及安赛蜜含量的同时测定。

四川豆瓣是以蚕豆为原料，利用米曲霉等多种微生物共同发酵制成的调味品。四川豆瓣拥有悠久的历史，已经成为川式调味料的重要品种之一。在四川豆瓣生产过程中，为保持产品风味、延长贮存周期，厂家会添加一定量食品添加剂。食品添加剂是以少量添加于食品，以改善食品的外观、风味、组织结构或贮存性质的合成或者天然的非营养物质。防腐剂（主要包括苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸）和人工合成甜味剂（主要包括糖精钠和安赛蜜）是食品行业中被广泛应用的食品添加剂，且经常混合使用。长期过量食用添加剂对人体有一定危害，GB 2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》对其使用范围和相应限量均有明确规定。国家标准报道的分析方法主要是针对这些添加剂中的一种或几种，同时检测四川豆瓣中上述五种食品添加剂的方法鲜见报道。本论文对四川豆瓣中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢的同时检测进行了一系列的研究，考察了检测波长、不同流动相体系、不同流动相比例、梯度洗脱以及流动相流速等检测条件对实验结果的影响，以期为豆瓣酱中五种添加剂的同时检测提供更简便易行的方法。

1 材料与仪器

1.1 材料与试剂

1.1.1 标准物质

苯甲酸标准溶液（1.0mg/mL）、山梨酸标准溶液（1.0mg/mL）、糖精钠标准溶液（1.0mg/mL）、安赛蜜标准溶液（1.0mg/mL）、脱氢乙酸（纯度大于等于 98.0%），购自德国 Dr.Ehrenstotfer。

1.1.2 标准储备液的配制

准确称取脱氢乙酸 10.000mg（准确至0.001mg）用水溶解定容至 10mL，即脱氢乙酸储备液浓度为 1.0mg/mL。

1.1.3 标准工作液的配制

分别准确吸取五种添加剂标准储备液0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.25mL、2.50mL、5.00mL 于 50mL 容量瓶中，用水稀释并定容到刻度，即得五种添加剂浓度分别为 2.0µg/mL、5.0µg/mL、10.0µg/mL、25.0µg/mL、50.0µg/mL、100.0µg/mL 的混合标准溶液。

1.1.4 试剂

甲醇（色谱纯，购自美国 Fisher 公司）；乙酸铵（色谱纯，CNW）；磷酸二氢钾（色谱纯）；硫酸铵（色谱纯）；试验用水为经 UP 净化系统0.22µm 过滤膜过滤的纯化水）。

1.2 仪器与设备

Agilent 1260 高效液相色谱仪系统（配有DAD 检测器）；电子分析天平（TLE204/02）：瑞典梅特勒托利多公司；KQ-250E 超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18；柱：4.6 mm×150mm，5µm；进样量：20µL。

1.3 实验方法

苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和脱氢乙酸均易溶于水，因此本次实验选择纯水作为样品的提取溶剂；由于四川豆瓣中含有较多油脂及蛋白质，实验采用将样品溶液加入亚铁氰化钾及乙酸锌沉淀去除蛋白质后，过 0.45µm 滤膜进样的方式。

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